四眼斑龟一般在5月初有雄龟追逐雌龟的现象，雄龟绕雌龟打转或在雌龟前面，头对着雌龟，伸长头颈，上下点动或左右摇动，不让雌龟爬动，若雌龟调转头，雄龟则紧追并绕到雌龟的前方。待雌龟不动时，雄龟再绕到雌龟的后面，爬到雌龟的背上，用前肢勾住雌龟的背甲前缘，伸直尾巴将紫黑色的交接器插入雌龟的泄殖腔内。交配后，雄龟从雌龟身上滑下。四眼斑龟交配多在水的中部或岸边进行。产卵期在5-6月中旬。每次1-2枚并有分批产卵的现象。卵长43mm宽22mm重15克左右。
保护级别
情况：濒危（IUCN 2.3）
该物种已被列入中国国家林业局2000年8月1日发布的《国家保护的有益的或者有重要经济、科学研究价值的陆生野生动物名录》。
